配制
环凯培养基必须使用高质量的水，如石英玻璃蒸馏器经三次蒸馏或超纯水净化装置制备的水。因为其缺乏了血清中天然成分中和毒素、保护细胞的大分子，既便水中的有毒物质含量甚微，也可能对细胞产生致死性损害。这是无血清培养能否成功的关键因素之一。
补充因子是代替血清的各种因子的总称。环凯培养基必须补加3-8种因子，胰岛素和转铁蛋白是必须补充因子，其他多数为辅助作用的因子。按其功能不同，补充因子可分为五类：
1、结合蛋白：常见如转铁蛋白和牛血清白蛋白。转铁蛋白与细胞上的转铁蛋白受体结合是细胞获取铁元素的主要来源。白蛋白与脂类、激素、维生素、金属离子和生长因子结合后可调节上述物质在无血清培养基中活性的作用，此外，由于牛血清白蛋白一般添加量比较大，可增加培养基的粘度，保护细胞免受机械损伤。
2、激素和生长因子：很多细胞用无血清培养时需要加入激素，如胰岛素、生长激素、胰高糖素等。胰岛素是重要的细胞存活因子，与细胞上的胰岛素受体结合后可促进RNA、蛋白质和脂肪酸的合成，抑制细胞凋亡。此外，雌二醇、孕酮等也是无血清培养基中常添加的补充因子。
3、酶抑制剂：培养贴壁生长的细胞，需要用胰酶消化传代，在无血清培养基中须含酶抑制剂，以终止酶的消化作用，达到保护细胞的目的。
4、贴壁因子：许多细胞必须贴壁才能生长，这种情况下无血清培养基中一定要添加促贴壁和扩展因子，一般为细胞外基质，如纤粘连蛋白、胶原蛋白等。它们还是重要的分裂素以及维持正常细胞功能的分化因子，对许多细胞的繁殖和分化，起着重要作用。纤粘连蛋白主要促进来自中胚层细胞的贴壁与分化，这些细胞包括成纤维细胞、肉瘤细胞、粒细胞、肾上皮细胞、肾上腺皮质细胞、CHO细胞、成肌细胞、CHO细胞等。
5、其他补充因子：一些细胞培养使用的无血清培养基还需要补充微量元素、维生素、脂类等低分子量物质。
