【原理】
蛋白胨和酵母膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;蔗糖为可发酵的糖类;抑菌剂抑制大部分非霍乱弧菌细菌,氯化钠可维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂;色素与霍乱弧菌所具有的酶发生特异性反应,水解底物,释放出显色基团,在淡黄色平板上产生绿-蓝绿色的菌落。
【配方】
霍乱弧菌显色培养基配方(每升):
蛋白胨 15g
酵母膏粉 5g
蔗糖 10g
氯化钠 5g
抑菌剂 5g
琼脂 13g
色素 3.1g
终pH 9.0±0.2
【使用方法】
1、取瓶内干粉56.1克,用100ml蒸馏水或纯水溶解,可按比例扩增或缩小。搅拌加热煮沸至*溶解,不需高压灭菌,冷至约50℃,倾注灭菌平皿。
2、以无菌操作取检样25 g(mL),加入碱性蛋白胨水225 mL,用旋转刀片式均质器以8 000 r/min均质1 min,或拍击式均质器拍击2 min,制备成1:10的均匀稀释液。如无均质器,则将样品放入无菌乳钵中磨碎,然后放在500 mL的灭菌容器内,加225 mL碱性蛋白胨水,并充分振荡。
3、增菌:将上述1:10稀释液于36 ℃±1 ℃培养6h~8h,如有需要可进行二次增菌。
4、分离
在增菌液中用接种环取一环,于霍乱弧菌显色平板上划线分离,于36 ℃±1 ℃培养18 h~24 h。
5、通过验证试验进一步确认假定性霍乱弧菌,如氧化酶、革兰氏染色等。
【质量控制】
本品倾注平皿后呈淡黄色
注:后的鉴定须做补充试验。
外观:
脱水培养基:浅黄色具流动性粉未。
制备好平板:淡黄色的胶。
储存条件和保质期:
脱水培养基:10-30℃,保质期二年。 制备好平板: 2-8℃,多保存两周。